發(fā)布時間： 2024-12-03 點(diǎn)擊次數(shù)： 944次
CEPT是美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）開發(fā)的小分子混合物。由4種成分組成，并取其組成成分（Chroman 1、Emricasan、Polyamines、Trans-ISRIB）的開頭字母命名為“CEPT"。研究表明，CEPT可防止人ES/iPS細(xì)胞（人多能干細(xì)胞：hPSCs）在細(xì)胞傳代中的細(xì)胞應(yīng)激和DNA損傷1）。與強(qiáng)效ROCK抑制劑Y-27632相似，可提高細(xì)胞傳代和凍存時hPSCs的存活率。此外，與基于hPSCs的胚狀體和類器官形成、單細(xì)胞克隆和基因編輯等干細(xì)胞研究中所用的現(xiàn)有培養(yǎng)方法相比，CEPT還可改善細(xì)胞存活率1,2,3）。FUJIFILM Wako已上線經(jīng)無菌測試且無需制備的即用型CEPT Cocktail溶液。本產(chǎn)品為經(jīng)過濾器滅菌的溶液，可直接添加至培養(yǎng)基使用。有助于再生醫(yī)療研究。1）Chen, Y. et al. : Nat. Methods, 18(5), 528 (2021).2）Tristan, C.A. et al. : Stem Cell Reports, 16, 3076 (2021).3）Tristan, C.A. et al. : Nat.Protoc., 18, 48 (2022).● 從DNA損傷等細(xì)胞應(yīng)激中保護(hù)ES/iPS細(xì)胞，維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能● 已通過內(nèi)毒素測試以及支原體陰性檢測的CultureSure系列以1/1,000的量添加本品至培養(yǎng)基，充分混合后使用。● 本產(chǎn)品為凍存品（-20°C）。為避免反復(fù)凍融，建議根據(jù)使用量分裝凍存。● 溶解時可能會出現(xiàn)沉淀，并非產(chǎn)品質(zhì)量問題，請直接使用。（沉淀于37°C下靜置1~2 h可能會溶解，請避免反復(fù)冷凍和加熱。）添加CEPT或Y-27632至含bFGF的StemSure® hPSC Δ培養(yǎng)基，在37°C，5% CO2的條件下培養(yǎng)人iPS細(xì)胞201B7株（6孔板 1 well=9.5cm2）。培養(yǎng)經(jīng)過16 h以后，更換不含CEPT或Y-27632的培養(yǎng)基，每2~3天更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)第8天時，確認(rèn)細(xì)胞后，使用4%多聚甲醛固定細(xì)胞，ALP染色后，計數(shù)細(xì)胞集落。添加CEPT或Y-27632至含bFGF的StemSure® hPSC Δ培養(yǎng)基，在37°C，5% CO2的條件下培養(yǎng)人iPS細(xì)胞201B7株（96孔板）。培養(yǎng)經(jīng)過16 h以后，更換不含CEPT或Y-27632的培養(yǎng)基，每2~3天更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)第13天時，確認(rèn)細(xì)胞后，使用4%多聚甲醛固定細(xì)胞，ALP染色后，計數(shù)形成細(xì)胞集落的孔數(shù)與空孔數(shù)。通過所有孔數(shù)與細(xì)胞集落形成孔數(shù)之比，計算細(xì)胞集落形成率。細(xì)胞接種數(shù)少時，添加CEPT的組比添加Y-27632的組形成的細(xì)胞集落更多。【細(xì)胞株】人iPS細(xì)胞201B7株
【培養(yǎng)基】StemSure® hPSC培養(yǎng)基Δ+35 ng/mL bFGFRed：rBC2LCN-635（人iPS細(xì)胞膜染色）※ BC2LCN是一種對存在與人ES/iPS細(xì)胞的膜表面的糖鏈具有高親和性的重組凝集素添加CEPT時與添加Y-27632時都未觀察到細(xì)胞形態(tài)的差異，均可確認(rèn)未分化維持狀態(tài)。
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